熒光抗體在使用前應(yīng)加以鑒定，鑒定指標(biāo)記包括效價及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率，抗體效價可以用瓊脂雙擴(kuò)散法進(jìn)行滴定，效價大于1:16者較為理想，熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率（F/P）的測定和計算的基本方法是：將制備的熒光抗體稀釋至A2801≈1.0，分別測讀A280（蛋白質(zhì)特異吸收峰）和標(biāo)記熒光素的特異吸收峰，按公式計算。

　　F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少，一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P＝1.5為宜，用于活細(xì)胞染色的以F/P＝2.4為宜。

　　熒光抗體工作濃度的確定方法類似ELISA間接法中酶標(biāo)抗體的滴定，將熒光抗體自1:4～1:256倍比稀釋，對切片標(biāo)本作熒光抗體染色。以能清晰顯示特異熒光、且非特異染色弱的最高稀釋度為熒光抗體工作濃度。

　　熒光抗體的保存應(yīng)注意防止抗體失活和防止熒光猝滅，最好小量分裝，－20℃凍存，這樣就可放置3～4年。在4℃中一般也可存放1～2年。

　　熒光抗體規(guī)律：

　?。?）初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)抗原次進(jìn)入機(jī)體時，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體，且抗體產(chǎn)生的量也不多，在體內(nèi)維持的時間也較短。

　　（2）再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后，開始時，由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合，可使原有抗體量略為降低。隨后，抗體效價迅速大量增加，可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍，在體內(nèi)留存的時間亦較長。

　?。?）回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，經(jīng)過一定時間后可逐漸消失。此時若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同，則稱為特異性回憶反應(yīng)；若與初次反應(yīng)不同，則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時性的，短時間內(nèi)即很快下降。